Zapraszamy na największą z dotychczasowych przygód Larry'ego Daleya (Ben Stiller) – tym razem przemierzy cały świat, pozna nowych bohaterów i ocali muzealną magię.
Wyobraźcie sobie, że nocami muzea ożywają. Widzowie zakochali się w historiach pokazywanych w filmach z serii „Noc w muzeum”. W trzeciej części bohaterowie stawią czoło ogromnemu wyzwaniu.
Ben Stiller po raz kolejny wcielił się w Larry'ego, a Shaw Levy znowu stanął za kamerą. Gdy Larry odkrywa, że jego przyjaciele, czyli eksponaty nowojorskiego Muzeum Historii Naturalnej, dziwnie się zachowują, postanawia odkryć, co jest tego przyczyną. Okazuje się, że tablica, dzięki której eksponaty ożywają, niszczeje i można ją uratować tylko w British Museum. Larry i jego syn Nick wyruszają do Londynu, by rozwikłać tajemnicę tablicy.